平末端指DNA分子两条 链在限制性内切酶作用下断裂的位置是处在 一个对称结构的中心,形成的一种平齐的末 端结构类型。大多数II型限制酶的识别序列 都是回文结构,即以双对称轴按5'—3'方向 阅读时,其碱基顺序都是相同的,所以当切割位点在对称轴上,限制片段为平末端。具 有平齐末端的DNA可以连接,但连接效率 只有黏性末端连接效率的1%。(李英碧)

定义

DNA分子两条链在限制性内切酶作用下断裂的位置是处在一个对称结构的中心,形成的一种平齐的末端结构类型

正文

当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时,切开的DNA两条单链的切口,是平整的,这样的切口叫平末端。

平末端

被限制性内切酶切断的DNA分子片段,需要一种特殊的酶——DNA连接酶来缝合,恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。E·coliDNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来,不能将双链DNA片段平末端之间进行连接。而T4DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端,又可以“缝合”双链DNA片段的平末端,但连接平末端之间的效率比较低。

提高平末端连接效率的措施

①提高T4DNA连接酶的浓度;②提高DNA片段的浓度;③降低ATP浓度,以增强连接物与DNA结合;④加入多胺化合物,如亚精胺,降低DNA的静电排斥力;⑤加浓缩剂,如大分子排阻物聚乙二醇(PEG)、强水化物三氯化六氨钴等。