百科首页 > 正文

亚细胞定位（某蛋白在细胞内的具体存在部位）

次浏览 | 更新时间：2023-05-22

来源：网络整理

精选百科

本文由作者推荐

亚细胞定位

某蛋白在细胞内的具体存在部位

亚细胞定位是指某种蛋白或表达产物在细胞内的具体存在部位。例如在核内、胞质内或者细胞膜上存在。GFP是绿色荧光蛋白，在扫描共聚焦显微镜的激光照射下会发出绿色荧光，从而可以精确地定位蛋白质的位置。

基本信息

中文名	亚细胞定位
外文名	subcellular localization

定义

GFP，实际是给你要研究的物质加上标记，在此相当于报告蛋白的作用。使用GFP必须构建融合蛋白载体，并在转染之后有效表达。这样，若在荧光显微镜下看到细胞内某一部位存在GFP信号，说明和GFP融合的蛋白也存在于该部位，这样就达到了确定某物质亚细胞定位的目的。

应用实例

基因枪法转化洋葱表皮细胞：

分别用70%乙醇和灭菌蒸馏水清洗金粉（直径为1 μm），加入灭菌蒸馏水制成金粉悬浮液，取100 μL 放在含有1.0 cm2 洋葱表皮的玻璃皿中，边振荡边加入10 μL pCambia2301-GaMYB2-GFP质粒，逐步加入40 μL 0.1 mol·L-1 亚精胺和100 μL2.5 mol·L-1 CaCl2，振荡混匀。基因枪GDS-80轰击时氦气罐的气压为1 300 psi，取10 μL DNA 包裹好的微粒悬浮液加到基因枪中央，进行轰击，之后放置25℃避光过夜培养，使用ConfocalLaser激光共聚焦显微镜观察。

亚细胞定位

GaMYB2 在洋葱表皮细胞中的瞬时表达分析：采用基因枪轰击的方法，用包裹质粒的金粉对洋葱表皮进行轰击，暗培养过夜后，在激光共聚焦显微镜下进行观察，从图A 中可以看出对照GFP空载体在整个洋葱细胞均能看到绿色荧光，为组成型表达；从图B 中发现GaMYB2-GFP 的融合表达载体只能在细胞核中能看到绿色荧光，这进一步证明该蛋白不具有跨膜蛋白结构，定位在细胞核中，具有转录因子的一般特征。

生物信息学预测法

不同的细胞器往往具有不同的理化环境，它根据蛋白质的结构及表面理化特征，选择性容纳蛋白。

蛋白质表面直接暴露于细胞器环境中，它由序列折叠过程决定，而后者取决于氨基酸组成。因此可以通过氨基酸组成进行亚细胞定位的生物信息学预测。

免疫荧光法

直接法

将标记的特异性荧光抗体，直接加在抗原标本上，经一定的温度和时间的染色，用水洗去未参加反应的多余荧光抗体，室温下干燥后封片、镜检。

间接法

如检查未知抗原，先用已知未标记的特异抗体（第一抗体）与抗原标本进行反应，用水洗去未反应的抗体，再用标记的抗抗体（第二抗体）与抗原标本反应，使之形成抗体—抗原—抗体复合物，再用水洗去未反应的标记抗体，干燥、封片后镜检。如果检查未知抗体，则表明抗原标本是已知的，待检血清为第一抗体，其它步骤的抗原检查相同。

亚细胞定位相关的文章

寺院（汉语词语）

寺院，汉语词语，读音sì yuàn；意思是指供奉佛菩萨的庙宇场所，有时也指其他宗教的修道院。但一般是指佛教进行宗教活动的场所。寺院是出家人进行宗教活动的场所，是佛教信徒顶礼膜拜的地方，也是出家僧众修行的所在，后来逐步发展为具有多种综合功能的建筑群。

希伯来语（多使用于以色列等地的语言）

希伯来语:（עִבְרִית）是犹太人民族语言，以色列通用语言，为世界上较为古老的语言之一。“希伯来”意为“渡河而来”，属于闪含语系闪米特语族的一个分支，没有元音字母，只有22个辅音字母，其文字从右往左书写。许多希伯来文学作品和文献都是用希伯来语写出来的，主要文献保留在《死海古卷》和大量犹太教以及基

旁遮普省（位于巴基斯坦东部的省份）

旁遮普省（旁遮普语： پنجاب；乌尔都语： پنجاب‎）位于巴基斯坦，是该国人口最多的省份，占全国人口的半数。旁遮普省是旁遮普人的聚居地，首府为拉合尔。该省的主要民族包括旁遮普人和色莱基人，还有从印度回归的穆斯林穆哈吉尔人。由于印度河的五条支流都流经此地，旁遮普省的名称来源于波斯语的Pañj，意

北凉（五胡十六国时期的割据政权）

北凉政权（公元397年—公元460年），五胡十六国之一，由汉人段业和匈奴支系卢水胡族的首领沮渠蒙逊建立。历五代君主，国祚六十四年。

提比略·恺撒·奥古斯都（罗马帝国第二位皇帝）

提比略·恺撒·奥古斯都罗马帝国第二位皇帝提比略，全名提比略·恺撒·（神君奥古斯都之子·）奥古斯都（拉丁语：Tiberius Caesar Divi Augusti filius Augustus，公元前42年11月16日—公元37年3月16日），原名提比略·克劳狄乌斯·尼禄或提比略·尤里乌斯·恺撒（Tiberius Claudius Nero或Tiberius Julius Caesar），中文又