末端脱氧核苷酸转移酶(terminal deoxyribonucleotidyl transferase,TdT,简称末端转移酶),是从动物(通常是牛) 胸腺和骨髓中分离提取的。

末端转移酶催化脱氧核苷酸添加到DNA 分子的3'-OH 末端,催化作用不需要模板,但需Co2+ 的存在。末端转移酶可给一群DNA 分子的3' -OH末端接上寡dA 或dC,而给另一群DNA 分子的3'-OH 末端接上寡dT 或dG,两群分子混合即可使同聚物尾部退火形成环状分子。

正文

末端转移酶的主要用途包括:

(1)给载体或CDNA加上互补的同聚尾(用于建立体外重组DNA分子时在DNA片段末端加上一一个同聚物尾巴,两种不同的DNA分子加上不同的但可以互补的即A和T、C和G的尾巴后,经过退火或复性,两种尾巴便可以借助互补作用连接在一起)。在CDNA文库建立时,这种加尾方法是使CDNA插人载体中的常用方法之一。

(2)用于DNA片段3'末端的放射性核素标记。末端转移酶在Mg2*存在的条件下,选择3'-OH端单链DNA为引物加成核苷酸,在CO+存在的条件下,选择3'-OH端双链DNA为引物加成核苷酸,形成多聚核苷酸尾。如果在反应系统中加人核素标记的核苷酸,那么便可得到3'端标记的DNA分子。该法常用于核酸末端标记和核酸连接的互补多聚尾(连接头)。