盐析（加入无机盐类使物质析出的过程）

定义

把动物脂肪或植物油与氢氧化钠按一定比例放在皂化锅内搅拌加热，反应后形成的高级脂肪酸钠、甘油、水形成混合物。往锅内加入食盐颗粒，搅拌、静置，使高级脂肪酸钠与甘油、水分离，浮在液面。（该反应用以制肥皂）

简单的说就是利用高浓度中性盐使蛋白质发生沉淀；蛋白质的溶解度（S）不同，用于沉淀的盐浓度不同。

(盐析实验中的蛋白质溶液不能太稀，而且要现用现配；必须用浓的轻金属溶液盐溶液，稀的轻金属盐溶液反而能促进蛋白质的溶解。）

结晶原理

盐析结晶

研究表明，水对阴、阳离子都有较强溶剂化作用，但对阳离子比阴离子有更大的溶剂化作用。因此盐析剂作用主要表现在盐析剂阳离子溶剂化作用上。盐析剂与水结合愈强烈，盐析效应愈强。由于水合数与离子的大小有关，即离子愈小，水合数就愈大，盐析效应也愈强。盐析剂所含阳离子半径愈小，电荷愈多，则对被盐析离子的水化层影响愈大，使被盐析离子脱水愈易，其盐析效应愈强。所以化工生产中常用的盐析剂多是离子势较大的阳离子Li+、Al3+、Fe3+、Mg2+、Sn2+等形成的盐。我们选择了这些阳离子所形成的氯化物和硝酸盐, 并通过探索性实验，确定选用一种较合适的盐析剂。

原理

破坏了蛋白质在水中稳定存在的二个因素，从而使蛋白质发生沉淀。

1、破坏了水化层

在高浓度的中性盐溶液中，由于盐离子亲水性比蛋白质强，与蛋白质胶粒争夺与水结合，破坏了蛋白质的水化层。在高浓度的中性盐溶液中，由于蛋白质和盐离子对溶液中水分子都有吸引力，产生与水化合现象，但它们之间有竞争作用，当大量中性盐加入时，使得盐解离产生的离子争夺了溶液中大部分自由水，从而破坏蛋白质的水化作用，引起蛋白质溶解度降低，故从溶液中沉淀出来。

2、破坏了电荷

由于盐是强电解质，解离作用强，盐的解离可抑制蛋白质弱电解质的解离，使蛋白质带电荷减少，更容易聚集析出。

盐析剂

在中性配合萃取和离子缔合萃取体系中，使用盐析剂可提高被萃取组分的分配系数。盐析剂是一种不被萃取、不与被萃物结合，但与被萃物有相同的阴离子从而使分配系数显著提高的无机化合物。通常盐析剂的阳离子在盐析过程中，因在水溶液中有强烈的水合作用，能吸引大量自由水分子，降低水溶液中自由水分子浓度，可相对增加被萃物在水相中的浓度，有利于被萃物萃入有机相。一般来说，盐析剂中的金属阳离子的电荷数越大，盐析作用越强。在阳离子的电荷数相同的情况下，盐析作用与阳离子的半径成反比，这是因为价态高半径小的阳离子的水化能力较强，所以使自由水分子减少的作用较大。一般金属离子的盐析效应按下列次序递减：

Al>Fe>Mg>Ca>Li>Na>NH4>K

盐析剂的选择除应考虑盐析作用外，还要考虑不影响下一步的分离和提纯、价格便宜、来源充足、水中溶解度大等因素。通常以NH4N03的应用最为普遍。

优点

不会引起蛋白质变性，经透析去盐后，能得到保持生物活性的纯化蛋白质。

注意事项

盐析的成败决定于溶液的pH值与离子强度，PH愈接近蛋白质的等电点，蛋白质就愈易沉淀。不同的蛋白质的溶解度与等电点不同，沉淀时所需的pH值与离子强度也不相同，故改变盐的浓度与溶液的pH值，便可将混合液中的蛋白质逐个盐析分开，这种分离蛋白质的方法称为分段盐析法（fractional salting out）。例如半饱和硫酸铵可沉淀血浆球蛋白，饱和硫酸铵则沉淀血浆清蛋白。

应用

可以把发黄的白衬衫放在5%食盐水中浸泡1小时，再慢慢搓干净；或将衣服浸于10%的浓盐水中，泡1-2小时，取出用清水漂洗干净。衣领部位的污渍可以单独加一些细盐粒轻轻搓洗效果更佳。应当注意的是衣服应当用凉水浸泡，切勿使用热水。

蛋白质四级结构

三级结构结构测定方法

生物化学与分子生物学方法与技术