金黄色葡萄球菌（人类的一种重要病原菌）

简介

金黄色葡萄球菌

新出现的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，被称作超级细菌，几乎能抵抗人类所有的药物，但是万古霉素可以对付它。典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适金黄色葡萄球菌普通培养基培养特点生长pH7.4，干燥环境下可存活数周。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径0.5~1.0mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10~15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物、青霉素、红霉素、土霉素、新霉素等抗生素敏感，但易产生耐药性，原因是由于这些菌株产生青霉素酶等。对碱性染料敏感，十万分之一的龙胆紫液即可抑制生长。

金黄色葡萄球菌是常见的食源性致病菌，广泛存在于自然环境中。金黄色葡萄球菌在适当的条件下，能够产生肠毒素，引起食物中毒。近几年，金黄色葡萄球菌引发的食物中毒报道层出不穷，由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒占食源性微生物食物中毒事件的25%左右，金黄色葡萄球菌成为仅次于沙门氏菌和副溶血杆菌的第三大微生物致病菌。

金黄色葡萄球菌对高温有一定的耐受能力，在80℃以上的高温环境下30min才可以将其彻底杀死，另外金黄色葡萄球菌可以存活于高盐环境，最高可以耐受15%浓度的NaCl溶液。由于细菌本身结构特点，利用70%的乙醇可以在几分钟之内将其快速杀死。金黄色葡萄球菌代谢类型为需氧或兼性厌氧，对环境要求不高，37℃为最适生长温度，能在各种恶劣环境中存活下来，因此，用一般的营养琼脂即可正常培养细菌。

金黄色葡萄球菌形态为球形，在培养基中菌落特征表现为圆形，菌落表面光滑，颜色为无色或者金黄色，无扩展生长特点，将金黄色葡萄球菌培养在哥伦比亚血平板中，在光下观察菌落会发现周围产生了透明的溶血圈。金黄色葡萄球菌在显微镜下排列成葡萄串状，金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜。是常见的引起食物中毒的致病菌。常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜。

流行病学

金黄色葡萄球菌

金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位，常成为污染源。

金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：

a.溶血毒素：外毒素，分α、β、γ、δ四种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死。

b.杀死白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞。

c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关。

d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌。

e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C1、C2、C3、D、E及F八种血清型。肠毒素可耐受100°C煮沸30分钟而不被破坏。它引起的食物中毒症状是呕吐和腹泻。此外，金黄色葡萄球菌还产生溶表皮素、明胶酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。

f.表皮剥脱毒素：引起烫伤样皮肤综合征，又称剥脱样皮炎。

g.毒性休克综合征毒素（tsst-1）肠毒素是一种单链小分子蛋白，分子量约26-29kDa，相对分子质量较低，具有热稳定性，对人体肠道产生破坏，导致呕吐腹泻等症状。目前研究已发现多种类型的肠毒素或类肠毒素，除传统肠毒素A(SEA)、B(SEB)、C(SEC)、D(SED)、E(SEE)之外，SEG、SEH、SEI、SEJ、SEK、SEL、SEM、SEN、SEO、SEP、SEQ、SER、SEU和SEV等肠毒素也不断被发现。

引发病症

金黄色葡萄球菌

球菌检验

金黄色葡萄球菌

样品处理：无菌取25g或25mL食品样品，放入225mL灭菌生理盐水中均质，制成10-1稀释液。

增菌培养：将10-1稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中，37°C培养24小时。

分离培养：将上述稀释液或培养液分别划线血平板和Baird-Parker平板，置37°C培养24~48小时。金黄色葡萄球菌在血平板上呈金黄或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周围有溶血圈。在Baird-Parker平板上菌落为圆形，直径2~3mm，颜色灰或黑色，周围有一浑浊带。

染色观察：从平板上挑取可疑性菌落进行革兰氏染色，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性，显微镜下呈葡萄状排列无芽胞、荚膜，直径0.5~1μm。

血浆凝固酶试验：吸取0.5mL兔血浆与0.5mL金黄色葡萄球菌试液浸液肉汤24小时培养物充分混匀，置36±1°C培养，每隔半小时观察一次，连续观察6小时，出现凝固，即将小试管倾斜或倒置时，内容物不流动，判为阳性。同时做阴阳性对照。耐热核酸酶试验：将24小时肉汤培养物沸水浴处理15min，用接种环划线刺种于甲苯胺兰-DNA平板，36±1°C培养24小时，在刺种线周围出现淡粉色者为阳性。本试验金黄色葡萄球菌为阳性。

第二，金黄色葡萄球菌肠毒素检测

金黄色葡萄球菌肠毒素的检测主要有动物试验、血清学试验、免疫荧光试验及酶联免疫吸附等方法，在此就不一一赘述。

防控措施

1.合理选择食品原料和配料，使用安全的水和食物原料，改善加工环境的卫生和操作者的个人卫生习惯，避免金黄色葡萄球菌对食品的污染。

2.牢记在安全的温度下保存食物，生熟分开，建议食物应该现做现吃。尽可能采取热处理确保杀灭细菌，热处理后避免二次污染。

3.对已感染或携带某种病原体的食品加工人员，应依据有关法律法规，限制其从事食品加工活动。

4.生产加工乳制品、肉类等高危食品的企业，应认真、严格的执行食品安全国家标准的相关规定。在加工过程中或在市场流通中发现产品检验的某些指标不符合食品安全国家标准，应以消费者利益为重，自觉把控出厂产品的质量、主动召回不合格产品，防范引起中毒事件的潜在风险。

5.政府相关部门要加强我国食品中金黄色葡萄球菌安全的风险识别和风险评估研究工作。重视并持续开展预防和控制食源性疾病的宣传教育，及时提醒消费者一旦发生疑似金黄色葡萄球菌肠毒素中毒，除立即将患者送往医院进行救治外，还要立即停止食用并封存可疑食品。同时对食品生产、加工、经营人员，普及预防食源性疾病的卫生学知识。

感染处理

由于MRSA（耐甲氧西林金黄色葡萄球菌）的存在，一般不使用青霉素。所以有金黄色葡萄球菌感染者，可选用：红霉素、新型青霉素、庆大霉素、万古霉素或先锋霉素Ⅵ治疗。

治疗事项

1、毛囊炎治疗要注意饮食，不要吃辛辣刺激性食物，不能喝酒。

2、不可用手搔抓患处，以防继发感染。

3、待症状完全消失以后，巩固1个疗程。

我国国家卫生和计划生育委员会于2013年发布《食品安全国家标准食品中致病菌限量》(GB29921-2013)  ，在国标中制定了金黄色葡萄球菌的限量标准，规定熟肉制品、熟制水产品、熟制粮食制品等8大类食品中，同批次采集5份样品，每份样品中的金黄色葡萄球菌浓度均不得超出1000CFU/g，仅允许其中1份样品在100~1000CFU/g之间。

传播途径

一般来说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。

培养方式

甘露醇高盐琼脂可用于金黄色葡萄球菌的选择性分离培养

蛋白胨和牛肉粉提供氮源、维生素和生长因子；D—甘露醇为可发酵糖类；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂；酚红为pH指示剂。

检测方法

世界上对食品中金黄色葡萄球菌的检测通常采用生化鉴定的手段，并在初期采用平板划线分离。当前我国检测食品中金黄色葡萄球菌依据国家标准《食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》(GB4789.10-2016)  中的方法进行。国家标准执行内容包括定性检测和定量检测两部分。在无菌条件下接种到肉汤中进行前增菌，最后将培养物接种划线，根据生化鉴定方法进行血清学鉴定。传统生化鉴定方法操作简单，稳定性强，成本低，是目前最常用的鉴定方法。

免疫学检测方法主要是基于免疫学理论研究，其是通过设计的抗原、抗体和免疫细胞，检测抗原和抗体的结合以及免疫细胞分泌的细胞因子的，从而达到检测目的一种实验方法。该技术方法主要包括酶联免疫法、免疫荧光法、免疫胶体金法等。

①酶联免疫法：其原理是利用抗体与抗原在载体表面的特异性结合，加入某种酶，酶与抗体或抗原结合在一起，从而形成可以跟踪抗体或抗原的标记物，由于抗原或抗体与受检样品的反应产生抗原或抗体的复合物，此时加入酶反应显色底物，产物的量的大小与检测物质的量的大小呈正相关，分析显色情况从而确定样品中待检测物的含量。目前已经开发了几种根据ELISA技术用于检测培养上清液和食物样品(例如干酪，土豆沙拉，火腿和牛奶)中的金黄色葡萄球菌。

②免疫荧光法：免疫荧光技术利用荧光色素对抗体或抗原进行标记，然后检测目标抗原或抗体。抗原和抗体特异结合后，通过考察荧光信号的强弱进行定性定量检测。与酶介导的免疫测定相比，基于荧光的免疫测定具有提供高通量分析和灵敏度的更大潜力。

③免疫胶体金法：该方法借助硝酸纤维膜为固定相载体，样品溶液通过毛细作用在试纸条中移动，在试纸条中同时加入了针对待检测物质特异性的抗原或抗体。与ELISA技术相比，免疫胶体金技术操作更为简单，对实验人员没有特别的技术要求，适合基层单位和现场诊断。但是免疫胶体金相比较ELISA法而言，灵敏度更低，且使用范围不广，需要进一步的研究。总体而言，免疫胶体金有着强大的发展潜力和广阔的应用前景。

该技术主要包括聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction，PCR）技术，核酸探针技术，环介导等温扩增技术等技术。

①聚合酶链反应技术：该方法的原理是在DNA聚合酶的作用下，游离的脱氧核糖核酸参照碱基互补配对的原则，以模板DNA为主链，通过提供一段引物，迅速的扩增DNA的双螺旋结构。PCR技术特异性强、敏感度高，已广泛应用于医学、生物学等领域中。PCR作为致病微生物的检测方法，稳定性强，是目前主流的检测方法。在微生物检测应用中，引物的设计以及靶序列的选择是PCR方法的核心。PCR法同时也有一定的局限性，由于该方法需要对样品进行增菌，食品成分复杂，会对实验造成干扰。与其他方法相比，PCR技术仪器设备价格高，需要花费的成本较高，推广普及需要一定的时间和资金支持。

②核酸探针技术：通过使用基因特异性核苷酸序列作为探针与目的DNA杂交的一种核酸杂交技术，通过检测该段特异性的标记物，从而判断是否含有目标微生物。核酸探针具有分子生物学检测技术的灵敏度高、特异性强的优点，但是实验周期长，操作繁琐，如果样品中目标微生物含量过低，极易造成样品目标微生物未检出，出现假阴性的实验结果。

③环介导等温扩增技术：该技术基于DNA扩增技术，能够在恒温条件下，根据设计的多对引物，利用链置换型DNA聚合酶快速的进行核酸的扩增。与PCR方法比较，环介导等温扩增法操作更加快捷简单，花费成本较低，且对仪器要求低，能够广泛利用在食源性致病微生物的检测中。

试剂盒法：试剂盒法通常将十多种，甚至几十种培养基或成分集中在特定微型装置内，通过观察微生物的生长和代谢过程的某些产物或现象，对试验现象进行分析，将传统试验中多次试验通过一次完成，缩短了检测时间。此法可大大缩短测试时间，在24h内得出结果，甚至某些可缩短至4h内。目前，用于检测金黄色葡萄球菌的成品试剂盒有API、MIS等。

测试片法：其将纸膜、纸片或胶片附着相关培养基和特定显色液作为金葡菌的培养载体，依据金葡菌在载体上的生长以及显色情况，来衡量食品中金黄色葡萄球菌的存在数量，该方法简便易行，但结果精度不高。