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分类信息嗜热脂肪牙孢杆菌:(Bacillus stearothermo philus)
引起“平酸”现象的细菌为嗜热性酸败菌。引起低酸性罐头酸败,是嗜热脂肪芽孢杆菌;引起牛奶和番茄制品罐头酸败的是凝结芽孢杆菌,是罐头工业至今发现最耐高温的芽孢杆菌。嗜热脂肪芽孢杆菌D121.1℃ =4~5分钟,而作为制订杀菌规程对象菌的肉毒梭状芽孢杆菌D121.1℃ =0.1~0.25分钟,可见嗜热脂肪芽孢杆菌的耐热性比肉毒梭状芽孢杆菌还要强得多。
革兰氏阳性菌,能运动,周生鞭毛。芽胞椭圆形,亚端生或端生,通常使孢囊膨大,最高生长温度65-75℃。能够葡萄糖产酸,水解淀粉。
凝结芽孢杆菌:(Bacillus Coagulans)
革兰氏阳性,能运动,周生鞭毛。芽孢椰圆形或柱状,一次端生或端生,偶尔中生,有些菌株孢囊膨大不明显,有些菌株的孢囊大。最高生长温度55-60℃,最低生长温度15-25℃。接触酶阳性,葡萄糖产酸。
检验方法1.试样制备
罐头样品预先经55℃保温一周,然后按正常方法进行开罐,吸取内容物液体1毫升,如为固体内容物则取1克,以无菌手续接种于3#培养基中,每罐接种2支。
2.增菌培养
接种试样的3#培养基试管,于55℃培养48小时,如发现指示剂由紫变黄即判断为阳性,同时进行涂片镜检为芽孢杆菌(有时不易检到芽胞),如阳性需继续培养48小时。
3.纯分离培养
将阳性培养基试管划线接种于3#培养基琼脂平板55℃培养48小时,检查有无可疑菌落(菌落黄色,周围有黄色环,中心色深不透明),如有可疑菌落则接种于普通琼脂斜面和芽胞培养基斜面,55℃培养24小时,涂片镜检观察有无芽胞,以及芽胞的形状及位置,并同时以普通琼脂斜面培养物进行生化学试验。
4.鉴别
菌体形态:为革兰氏阳性芽孢杆菌。
生化反应:取上项斜面培养物按下列项目进行鉴别。
平酸菌生化反应鉴别表
| 项目菌别 | 60℃培养 | 硝酸盐 | 葡萄糖 | 靛基质 | V-P反应 | 7%NaCL肉汤 | 柠檬酸盐 | 酸性胰胨 |
| 嗜热脂肪芽孢杆菌 | 生长 | d + | + | - | - | - | - | 不生长 |
| 凝结芽孢杆菌 | 不定 | d- | - | - | + | - | b | 生长 |
注:+为产酸或阳性,-为阴性d+:50-85%的阳性d-:15--49%的阳性b:25-49%阳性 45-55℃培养三天后无反应报告为阴性。
5.培养基的配方
①3#葡萄糖肉汤培养:蛋白胨 5克 葡萄糖 5克 酵母浸膏 1克 牛肉膏 5克 可溶性淀粉 1克 黄豆浸出液 50mL 水1000mL 0.4%溴甲酚紫 4mL pH 7.0-7.2 115℃高压灭菌15min
②3#培养基琼脂: 3#葡萄糖肉汤 1000mL 琼脂 18-20克 pH 7.2-7.4 121℃高压灭菌15min
③酸性胰胨琼脂 胰蛋白胨 5克 酵母膏 5克 葡萄糖 5克 K2HPO4 4克 水1000mL 琼脂 18-22克(15-20g) 琼脂粉 12克 pH5.0 121℃高压灭菌15 min
④7%NaCL肉汤 蛋白胨 5克 牛肉膏 3克 NaCL 70克 水 1000mL pH7.0 121℃高压灭菌15min
⑤芽胞培养基 牛肉膏 10克 蛋白胨 10克 NaCL 5克 K2HPO4 3克 (K2HPO4 3H2O 3.9克) MnSO4 0.03克 琼脂 25克 pH 7.2 121℃高压灭菌15min
⑥V-P培养基 蛋白胨 5克 葡萄糖 5克 K2HPO4 5克 蒸馏水 1000mL pH7.2 121℃高压灭菌15min
⑦西蒙氏枸橼酸盐琼脂(柠檬酸盐) NaCL 5克 硫酸镁 0.2克 磷酸铵(NH4H2PO4)1克 磷酸氢二钾K2HPO4)1克 枸橼酸钠 5克 琼脂 20克 蒸馏水 1000mL 0.2%溴麝香草酚兰酒精溶液 40mL pH 6.8 121℃高压灭菌15min
⑧童汉氏蛋白胨水 蛋白胨 10克 NaCL 5克 蒸馏水 1000mL pH 7.4 121℃高压灭菌15min ⑨硝酸盐肉汤 牛肉膏 3克 蛋白胨 5克 硝酸钾 1克 蒸馏水 1000mL pH 7.0 121℃高压灭菌20min(15min)